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| INTRODUCTION • Rappels des bases de biologie moléculaire • Principe de la réaction de polymérisation en chaine (PCR) • Lutte contre la contamination (procédures, locaux, réglementation) • Réverse - transcription et PCR Principe Méthodologies Réaction en une étape versus deux étapes PCR QUANTITATIVE • Principe de la PCR Quantitative • Méthodologies (détection aspécifique, détection spécifique par sondes (différents types de sondes) Appareillage, marqueurs fluorescents Multiplexage (cible(s) : témoin interne) Temps réel et quantification • Quantification Cible témoin de quantification (différentes stratégies) Gamme d’étalonnage Quantifications Inhibition partielle de la réaction • Développement de tests multiplexés (études de cas) Choix des sondes et des marqueurs Optimisation des conditions (températures, temps, concentrations, mélange réactionnel) • Validation d’un test PCR temps réel au sens pharmaceutique Test qualitatif (présence/absence) Test quantitatif • Application (études de cas) • Contrôle de médicaments Cible virale ADN, Cible fongique ADN Cible virale ARN |
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